19.除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？

改變流動相組成和溫度；改變柱長、柱內徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。

20.什么是強溶劑、弱溶劑？

改變流動相的組成或溶劑溶劑強度就可以改變峰容量因子和保留時間。在一定條件下，減少保留時間或縮短分析時間的溶劑為強溶劑，增加保留時間或延長分析時間的溶劑為弱溶劑。

21.怎樣才會使峰位發(fā)生重排？

在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發(fā)生峰位的重排。下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動相中換了強溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。

22.除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些？

加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

23.評價一個色譜柱的最基本指標有那些？

評介一根色譜柱的基本指標是：塔板數、峰不對稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。

24.什么是色譜的時間常數？

時間常數實際上是響應時間的設定，起著過濾噪音的作用。時間常數太?。ㄌ欤┛赡茉黾佣淘胍?，時間常數太大（太慢）可能出寬峰、拖尾峰。

25.為什么在實驗過程中有時會出現倒峰？

所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進在此波長下沒有吸收或吸收低于流動相的溶液，在流動相中會出現洞穴，通過柱后出現倒峰。

26.為何會出現“胖"峰和平頭峰？怎樣避免？

用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質量，而出現“胖"峰和平頭峰。應遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A最好用流動相溶解樣品進樣。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進樣，主要缺點是每次進樣后在色譜圖的開頭出現大的負峰，有時還波及到樣品峰。C需要時用強溶劑溶解進樣。

27.什么是次級保留效應？

在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過程被保留。如在反相色譜中，溶質與柱填料的非極性烷基鏈發(fā)生疏水性相互作用。但在以硅膠為基質的填料中，有些樣品組分能與硅醇基團相互作用，脫附的過程很慢，使峰嚴重拖尾，這就是次保留過程。對付次保留效應最有效的方法就是選用封尾更好色譜柱或加入流動相改良劑（也叫掃尾劑）。

28.前延峰的發(fā)生及處理？

因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現象消失。在離子對色譜中，前延峰的另一個原因是用非流動相作樣品溶劑。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進樣量不要太大，否則會導致前延峰或其它問題。在RP-HPLC中樣品溶液的強度大于流動相引起前延峰。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應。此外使用流動相溶解樣品是解決的最簡單實用的方法。

29.峰變寬的原因？

A在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效。B柱外峰寬效應。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數降低，說明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應。C化學效應，多數是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。

30.柱平衡慢的常見原因有哪些？

柱平衡慢的常見原因是，組分在舊的或新的流動相中對柱吸附強，或者在新的流動相中濃度小甚至為零。A流動相含有胺改良劑；B流動相含有離子對試劑；硅膠柱；流動相中有四氫呋喃。可考慮采用專用柱用于特殊的方法，不用時將柱折下來，注滿適當的溶劑或流動相，密封保管，不再作其它的分析。

31.用內標法實驗時對內標物的要求有哪些？

A內標物的結構或理化性質應與被分析組分相似或相近；B內標物的保留值應稍大于或小于被分析物的保留，不能相差過大；C內標物的峰要與所有被分析物的峰有良好的分離度（R大于1.5），不能讓內標物成了干擾物；D無結構相似的內標物，可用保留相近的內標物；E儀器對分析物的響應與內標基本一致，出峰面積大小不能相差懸殊。

32.管子切割與安裝注意事項？

A管子的斷面必須垂直，否則，將會產生死體積而引起色譜峰峰形擴展。B確保管子內表面不被損傷，如果損傷，可能會發(fā)生管路堵塞。C將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止。否則，將會產生死體積而引起色譜峰峰形擴展。D不要過分擰緊螺帽，以防損壞螺紋。

33. 什么是HPLC的“無限直徑效應"？

在HPLC分析中由于使用了高效微粒固定相及高壓流動相，樣品以柱塞式注入色譜柱后，因柱的阻力大，樣品分子在柱中的分子擴散很小，直至它從色譜柱流出也未與色譜柱內壁接觸，因而引起的色譜峰形擴展很小，能保持高柱效。

34.如何評價一臺檢測器？

A噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質作用產生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動；

B基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動，可在較長時間（0.5~1h）內觀察到。它可掩蔽噪聲和小峰。漂移與整個液相色譜系統(tǒng)有關，而不僅是由檢測器引起的；

C靈敏度（最小檢出濃度或最小檢出量）：在一個特定分離工作中， 檢測器是否有足夠的靈敏度是十分重要的。當比較檢測器時，常使用敏感度這一性能指標。敏感度即指信號與噪聲的比值（信噪比）等于2時，在單位時間內進入檢測器的溶質的濃度或質量；

D線性范圍：在進行定量分析時，希望檢測器有寬的線性范圍，以便在一次分析中可同時對主要組分和痕量組分同時進行檢測；

E檢測器的池體積：它應小于最早流出的死時間色譜峰的洗脫體積的1/10，否則會產生嚴重的柱外譜帶擴展。

35.如何簡單判斷比例閥是否內漏？

設定泵使用一個單獨通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內的溶劑是否隨著流動，正常時均不應流動。

36、色譜峰面積與已知濃度溶液的成分不成比例

可能原因：36.1保留時間出現錯位，影響因素：室內溫度25左右，溫度波動大；流動相比例必須嚴格精密配置，醋酸增加會影響流動相的PH值；

37、流動相中不同成分對峰形、分離度的影響

對于反向色譜法，一般為非極性固定相c18和C8， 流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫富喃等與水互溶的有機溶劑用于調整保留時間，為控制樣品在流動相中的解離，常用緩沖液（冰醋酸）控制流動相的PH值，c18和C8的PH值多控制在2.5-7.5之間。冰醋酸可調整流動相PH值，另外可減少峰形脫尾。增加分離度可適量減少甲醇。