HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng)

    1、保持貯液瓶清潔，對專用貯液瓶應(yīng)定期清洗；用試劑瓶作貯液瓶時，要經(jīng)常更換。

    2、定期（如半個月）在稀硝酸溶液中超聲、清洗過濾器，保持過濾器暢通無阻。

    3、使用HPLC試劑和新蒸二次蒸餾水作流動相，所使用的溶劑其截止波長一定要低于檢測波長，對不是HPLC級的試劑要進行過濾（HPLC試劑出廠前已用0.02μm濾膜過濾）。對流動相一定要脫氣。

    4、每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動池以及其它流路系統(tǒng)中無氣泡存在。

    5、珍惜保護色譜柱，避免柱頭突然產(chǎn)生大的波動，擾動損傷柱床。如避免泵啟動過速、升壓過快、樣品閥搬動過慢所造成的柱壓大的波動。

    6、采用保護（警戒）柱，延長柱壽命。如污染物堆積于保護柱柱頭，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時，卸下用強溶劑反沖后再用或更換新保護柱。

    7、避免超負荷進樣，對250×4.6mm的柱子,絕對進樣量應(yīng)不超過100μg。在靈敏度允許的前提下，應(yīng)盡量將試樣濃度降低，減少絕對進樣量（進樣體積可保持不變），這是保持HPLC柱性能持久良好的重要舉措之一。

    8、經(jīng)常用強溶劑沖洗柱子，將柱內(nèi)強保留組分及時洗脫出。反相柱用異丙醇--二氯甲烷（1：1）沖洗，正相（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時間均不少于1h。

    9、做完試驗，及時用適當溶劑沖洗柱子和進樣閥，尤其是對過夜的柱子和進樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類、緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非極性有機溶劑（如己烷）中。

    10、以硅膠為基質(zhì)的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流動相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。

    11、盡量用流動相溶解樣品，一是避免出現(xiàn)拖尾峰、怪峰，二是避免試樣在系統(tǒng)中由于溶解度降低而析出。

    12、對于阻塞或受傷嚴重的柱子，必要時，可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對塌陷污染的柱床進行清除、填充、修補工作，此舉可使柱效恢復(fù)到一定程度（80%），有繼續(xù)使用的價值。

    13、色譜儀檢測器輸出與積分儀（處理機）要匹配，要合理設(shè)置參數(shù)如斜率、半峰寬、閾值、AUFS值、衰減等。將適宜的進樣量和合適的參數(shù)結(jié)合起來，使主峰峰高達到記錄儀滿量程的80%左右。

    14、用HPLC分析酸堿性物質(zhì)，由于吸附作用（次級保留）使峰開拖尾。加入改良劑可以大大改善峰形，提高積分的準確度。一般規(guī)則是：（1）分析酸性物質(zhì)，可加入1%有醋酸。（2）分析堿性物質(zhì)，10-20mmol/L三乙胺。（3）酸堿物質(zhì)混為一體，可同時加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺