Ⅰ  目的：制定Agilent 1290超高效液相色譜儀使用操作規程，確保操作人員能正確規范地操作液相色譜儀。

Ⅱ  范圍：適用于Agilent1290超高效液相色譜儀的使用。

Ⅲ  規程：

1 開機

1.1 打開計算機，進入 Windows畫面。

1.2 打開 1290INFINITY HPLC 各模塊電源。

1.3 待各模塊自檢完成后，雙擊“Instrument 1 Online”圖標，化學工作站自動與12001290INFINITY HPLC 通訊。

1.4 從“View”菜單中選擇“方法和運行控制”畫面， 點擊”視圖”菜單中的“樣品視圖“系統視圖”， 使其命令前有“√”標志，來調用所需的界面。

1.5 點擊泵下面的瓶圖標，選擇‘瓶填充‘如下圖所示，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積。點擊“Ok”。

1.6 從菜單 “視圖”中，選中“在線信號”，選中“信號窗口 1”，然后點擊“改變…” 鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊“確定”。(如同時檢測二個信號，則重復選中“信號窗口 2”)

2 排氣

2.1 首先在方法編輯中，泵的參數設置部分，選好需要排空的通道（保證是開的）

2.2 點擊儀器狀態視圖中泵的圖標，選擇控制，出現如下圖

2.3 勾上吹掃，并且輸入流速，時間，比例就可以 purge 泵頭。排空的時候閥會自動切換，無需人為介入。

2.4 當我們發現泵頭里面有氣泡出不來的時候，選擇預備---開。然后點擊確定。此時泵會用很強烈的方式朝外泵液體，并持續 20 次自動停止。

3 編輯數據采集方法

3.1 開始編輯完整方法：

從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法…” 項，如下圖所示選中除“數據分析 ”外的三項，點擊“確定” ，進入下一畫面。

3.2 方法信息：

在“方法注釋”中加入方法的信息（如：This is for test!） 。 點擊 “確定” ， 進入下一畫面。

3.3 進樣方式選擇

根據自動進樣器的類型，選擇合適的進樣方式。

3.4 泵參數設定：

在“流速”處輸入流量，如 1.5ml/min，停止時間：10 min。在“溶劑B”處輸入 70.0，(A=100-B) ，也可“插入 ”一行“時間表” ，編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。

3.5 自動進樣器參數設定:

選擇合適的進樣方式， 如圖所示，進樣體積 1.0ul ，標準進樣”----只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能。 “洗針進樣”----可以輸入進樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在針座旁邊中洗針。

3.6 柱溫箱參數設定:

在“溫度”下面的空白方框內輸入所需溫度，如：40度。并選中它，點擊“更多信息>>” 鍵，如圖所示，選中“與左側相同”，使柱溫箱的溫度左右一致。

3.7 DAD檢測器參數設定:

檢測波長: 254nm，帶寬=4nm， 參比波長=360nm，帶寬=100nm;

檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬： 一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區域 。 參比帶寬： 至少要與樣品信號的帶寬相等， 許多情況下用100nm作為缺省值。峰寬（響應時間） ：其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。狹縫-狹縫窄，光譜分辨率高；寬時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選中所用的燈。 可以開啟光學單元溫度控制;可以設定8通道信號等。

3.8 FLD 檢測器參數設定:

色譜條件：

響應時間=4s. 停止時間： 4min。

激發波長:200-700nm，步長為 1nm，或零級。

發射波長: 280-900nm， 步長為 1nm，或零級。

PMT:多數應用適當的設定值為 10，若高濃度樣品峰被切平頭，則減少 PMT 值。

“峰寬”：大多數應用設為 4s，只有快速分析采用小的設定值。

多波長及光譜（激發） 。 多波長及光譜（發射） 。

同時可以輸入范圍、步長、采集光譜。

點擊“確定”進入下一畫面。

3.9 運行時選項表

在“ 運行時選項表 ”中，選中“ 數據采集” ，點擊“確定” 。

3.10 保存方法

從“方法”菜單，選中“方法另存為…” ，輸入一方法名，如“測試” ，點擊“確定。

4 單次樣品運行

從“運行控制”菜單中，選擇“樣品信息”選項，如下圖所示，輸入操作者名稱，如“安裝工程師” ；在“數據文件 ”中選擇“手動”或“前綴/計數器” 。

點擊“確定”，從“系統視圖 菜單啟動系統。

等儀器準備好，基線平穩，從“運行控制”菜單中選擇“運行方法” ，進樣。(若無自動樣器，則基線平穩后，進樣并搬動手動進樣閥，啟動運行。)

5 面積百分比數據處理

5.1 選擇界面

從“視圖”菜單中，點擊“數據分析”進入數據分析畫面。

5.2 調用信號

從“文件”菜單選擇“調用信號” ，選中您的數據文件名，如下圖所示。點擊“ 確定” ，則數據被調出。

5.3 做譜圖優化：

從“圖形”菜單中選擇“信號選項” ，如下圖所示。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動量程” 及合適的時間范圍或選擇“自定義量程” 調整。反復進行，直到圖的比例合適為止。點擊“ 確定” 。

5.4 積分優化:

從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項，如下圖所示。選擇合適的“斜率靈敏度” ， “峰寬” ， “最小峰面積” ， “最小峰高” 。

從“積分”菜單中選擇“積分”選項， 則數據被積分。

如積分結果不理想，則修改相應的積分參數，直到滿意為止。

點擊左邊“√”圖標，將積分參數存入方法。

5.5 打印報告:

從“報告”菜單中選擇“設定報告”選項，進入如下圖所示畫面。

點擊“定量結果”框中“計算”右側的黑三角，選中“面積百分比” ，其它選項不變。 點擊“ 確定” 。

從“報告”菜單中選擇“打印報告” ，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告” 底部的“打印”鈕。

6 關機

關機前，先關燈，用相應的溶劑充分沖洗系統。

退出化學工作站，依提示關泵，及其它窗口，關閉計算機（用 shut down 關） 。

關閉 Agilent 1290 各模塊電源開關。

7 定量數據處理

7.1 點擊“方法”菜單，選擇“調用方法L..”，在方法目錄中選擇要進行定量設定的方法，該方法是經過積分和譜圖優化過的方法。點擊“確定”，則選擇的方法被調出。

7.2 從“文件”菜單中選擇“調用信號…”選項， 選中標樣的數據文件名， 點擊 “確定”，則數據被調出。檢查確認積分和譜圖優化的參數是否合適。

7.3 從“校正”菜單中選擇，“新建校正表”按鈕，進入以下畫面， 確認選項在“自動設定”；級別為“1”，點擊“確定”。若要信號單獨計算，則選擇前面的空白框。

7.4 在覆蓋現有校準表中對話框中，選擇“是（Y）”。若方法中沒有舊的校準表，無此項。

7.5 則所有積過分的峰，其保留時間、峰面積按序顯示在校準表中。如圖所示，依次輸入化合物的名稱、含量，校準曲線顯示在右下方。可以設定參考峰等。若用內標方法定量，還須選擇內標，點擊“內標“下的區域，選擇那個峰作為內標峰，指定每個色譜峰以那個內標為參比。點擊“確定”。

7.6 在刪除含量為零的行對話框中選擇“是（Y）”。則校準表中未輸入含量的峰從表中刪除。

7.7 點擊“校準”菜單，選擇“校準設置”按鈕，進入以下畫面，輸入單位：如“%”；其它項不變。點擊“確定”。

7.8 打印報告:

　 從“報告”菜單中選擇“ 指定報告…”選項。點擊“定量結果”框中“定量”右側的黑三角，選中“外標法”，其它選項不變。點擊“確定”。----若是用內標法定量，則選“內標法”。

　 從“報告”菜單中選擇“打印報告“，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告“ 底部的“打印”鈕。---可以選擇打印到文件中，如PDF格式。

7.9 若有多個濃度標樣，則依次調出校準數據，調出每一個校準數據后，點擊“校準”菜單，選擇“添加級別“，第2級數入”2“，類推。 在校準表中輸入每級的組份濃度。

7.10 在方法菜單中，選擇“運行時選項表”，確認“數據分析選項”也被選中，點擊“確定”。點擊“保存”按鈕，存儲修改的方法。此方法包含校準表，建立完畢。