1 儀器組成與開(kāi)機(jī)

1．1 本儀器由Class-VP工作站、在線脫氣機(jī)、輸液泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和檢測(cè)器等部件組成。各部分的操作均可由工作站或液晶面板控制完成。

1．2 分別打開(kāi)計(jì)算機(jī)、LC-2010A/C高效液相色譜儀的電源開(kāi)關(guān)。

1．3 儀器約需3min時(shí)間完成自檢過(guò)程，此時(shí)雙擊【Class-VP】快捷方式圖標(biāo)后，雙擊【Instrument l】可進(jìn)入聯(lián)機(jī)狀態(tài)；雙擊【Offline Processing】可進(jìn)入脫機(jī)狀態(tài)（聯(lián)機(jī)狀態(tài)下可實(shí)現(xiàn)計(jì)算機(jī)對(duì)儀器的操縱控制以及在線據(jù)的采集和分析；脫機(jī)狀態(tài)下可實(shí)現(xiàn)已采集數(shù)據(jù)的處理和再分析）。

1．4 在聯(lián)機(jī)狀態(tài)下，計(jì)算機(jī)屏幕顯示Class-VP 6.12工作站畫(huà)面，此時(shí)得用工具欄上的【Auto Purge】按鈕對(duì)儀器管路進(jìn)行徹底的沖洗并排除可能存在的氣泡，【Auto Purge】功能將按照操作者的設(shè)置自動(dòng)進(jìn)行和停止（本機(jī)為四元低壓梯度系統(tǒng)，分為A、B、C、D、R五個(gè)流路并配有五路在線脫氣機(jī)。其中R流路為自動(dòng)進(jìn) 樣器的清洗流路。在進(jìn)行Purge時(shí)，可以只選擇所需要的流路進(jìn)行Purge，但第R路是必選項(xiàng))。

2 分析方法的建立、存儲(chǔ)和調(diào)用

2．1 分析方法的建立

2．1．1 單擊菜單欄中的【File→Method→New】以便建立一種新方法。

2．1．2 此時(shí)【LC Setup Assistant-System】對(duì)話框?qū)@示當(dāng)前的分析方法名為Untitled.met，單擊【Simple Setting】可進(jìn)行常規(guī)分析條件的設(shè)定；單擊【Method→Instrument Setup】可進(jìn)行復(fù)雜分析條件的設(shè)定。

2．1．3 利用【Simple Setting】進(jìn)行常規(guī)分析條件的設(shè)定在Mode中選擇“Low Prerrure Gradient”；在Pump框中設(shè)定流速、各流路（通道）的比例、最大最小壓力限；在【Oven】框中設(shè)定柱溫；確保【Detector A】復(fù)選項(xiàng)被選中后，在其中設(shè)定所需的檢測(cè)波長(zhǎng)；在【Time Program】中設(shè)定液相停止時(shí)間以及采集停止時(shí)間（一般情況下二者一致。可選擇【LC Stop】時(shí)間后，單擊【Apply to All Aequisition Time】按鈕使二者一致）。單擊【Download】按鈕，使所設(shè)定的分析條件成為當(dāng)前分析方法（每當(dāng)完成一種新的設(shè)定后，一般均應(yīng)執(zhí)行此步驟，后不贅 述）。此時(shí)，若儀器的系統(tǒng)控制器沒(méi)有打開(kāi)，可單擊工具欄上的【Instrument On/Off】按鈕，儀器將按照所設(shè)定的條件開(kāi)始進(jìn)行。

2．1．4 利用【Method】→【Instrument Setup】進(jìn)行復(fù)雜分析條件的設(shè)定該部分中可對(duì)泵、柱溫、檢測(cè)器、系統(tǒng)控制器、時(shí)間程序等組件或程序進(jìn)行更進(jìn)一步的設(shè)定和控制。如：設(shè)定檢測(cè)器的靈敏度、D2燈的開(kāi)關(guān)、梯度洗脫程序的設(shè)定等。

2．1．5 峰/組表（Peak/Group Tables）的設(shè)定

2．1．5．1 打開(kāi)校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜文件，點(diǎn)擊積分事件工具欄中的【Define Peaks】按鈕，按狀態(tài)欄的提示進(jìn)行操作，將要校準(zhǔn)的峰（此處即為校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰）的保留時(shí)間及保留時(shí)間窗口添加到峰表中。

2．1．5．2 選擇【Method】→【Peak/Group Tables】打開(kāi)峰表。在峰表中輸入要校準(zhǔn)的峰的相關(guān)信息，其中【ID】、【Ret Time】Window已自動(dòng)添加，其他需要輸入的內(nèi)容為：【Name】 （組分峰的名稱(chēng)）、【ISTD ID#】（內(nèi)標(biāo)峰的ID號(hào)）、【Units】（報(bào)告結(jié)果的濃度單位）、【Analysis Channel】（選擇所用的檢測(cè)通道）、【Fit Type】（選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線的類(lèi)型，如點(diǎn)到點(diǎn)、線性、二次曲線等方式）、【Zero】（選擇后強(qiáng)制校準(zhǔn)曲線通過(guò)零點(diǎn)）、【Calib Flag】（選擇Weight Average）、【Level 1~10】（輸入各組分中每份校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量及其內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量）等。

2．2 分析方法的存儲(chǔ)

分析方法建立后應(yīng)及時(shí)利用菜單欄中的【File→Method→Save（Save As）】或單擊常用工具欄中的保存按鈕進(jìn)行存儲(chǔ)。分析方法一般建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP\Methods中或其他個(gè)人文件夾中（無(wú)論新建還是調(diào)用 一種方法，在對(duì)方法本身做了任何的設(shè)定或改動(dòng)后均應(yīng)隨時(shí)點(diǎn)擊常用工具欄中的保存按鈕，以防信息丟失！后不贅述）。

2．3 分析方法的調(diào)用

如果想調(diào)用一種已存的分析方法，單擊菜單欄中的【File→Method→Open】后，選中所需的分析方法并單擊“打開(kāi)”。此時(shí)，【LC Setup Assistant-System】對(duì)話框中將顯示所打開(kāi)的分析方法名，其中操作同2．1。

3 供試品分析

3．1 建立或調(diào)用一種分析方法(詳見(jiàn)2)。

單擊菜單欄中【File→Method→Open】，選中所需要的分析方法并單擊“打開(kāi)”，單擊【Download】按鈕，若儀器的系統(tǒng)控制器沒(méi)有打開(kāi)，可單擊工具欄上的【InstrumentON/OFF】按鈕，此時(shí)儀器將按照所選定的分析方法條件開(kāi)始運(yùn)行。進(jìn)樣采集前可以按動(dòng)工具欄上的【Zero Detector】按鈕將檢測(cè)器的基線手動(dòng)回零（本機(jī)具有采集時(shí)自動(dòng)回零功能，此項(xiàng)亦可不做）。

3．2 單次進(jìn)樣采集分析

當(dāng)色譜柱和檢測(cè)器已充分平衡和穩(wěn)定后，單擊【Single Run】按鈕，在出現(xiàn)的對(duì)話框中規(guī)定方法文件名（該名稱(chēng)應(yīng)與您所建立或調(diào)用的方法文件名一致）、數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)路徑（建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP \Data\hplc中或其他個(gè)人文件夾中）、數(shù)據(jù)文件名、自動(dòng)進(jìn)樣器的瓶號(hào)（樣品架位號(hào)）（如果采用的是140位的樣品架，則樣品架位號(hào) 為：10001~10070，為左位樣品架1L；20001~20070，為右位樣品架2R，進(jìn)樣體積（μL）。單擊【Start】，儀器開(kāi)始單次進(jìn)樣采 集分析，此時(shí)出現(xiàn)采集畫(huà)面，采集完畢可以進(jìn)行色譜峰的自動(dòng)或手動(dòng)分析。重復(fù)上述步驟進(jìn)行下一次單次進(jìn)樣采集分析。

3．3 序列（多次）進(jìn)樣采集分析

3．3．1 序列（Sequence）的建立、存儲(chǔ)和調(diào)用

3．3．1．1 序列（Sequence）的建立單擊菜單欄中的【File】→【Sequence】→【New】，出現(xiàn)【New Sequence】對(duì)話框，在此規(guī)定方法文件名、數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)路徑、數(shù)據(jù)文件名、自動(dòng)進(jìn)樣器的瓶號(hào)范圍（開(kāi)始瓶號(hào)和結(jié)束瓶號(hào)）、進(jìn)樣體積、重復(fù)進(jìn)樣次數(shù)等 信息（原則同3.2）。 單擊【OK】后，出現(xiàn)序列（Sequence）列表，在此可以進(jìn)行更為詳盡的Sequence編輯。如：【Run Type】（將校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的首次運(yùn)行設(shè)定為【Begin Calibration】和【Clear All Calibration】；將校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行類(lèi)型均設(shè)為【End Calibration】，則中間的運(yùn)行自動(dòng)變?yōu)椤綜alibration】，供試品的運(yùn)行類(lèi)型均設(shè)為【Unknown】、【Level】（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的 Level值應(yīng)與峰表中的Level值相對(duì)應(yīng)，依次輸入1~10的水平代碼；供試品的Level值均為0、

【Sample Amount】（校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量均輸入1；供試品的量輸入相應(yīng)的具體數(shù)值）、

【ISTD Amount】（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的內(nèi)標(biāo)量均輸入【1】；供試品的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量輸入相應(yīng)的具體數(shù)值）。更為詳盡的參數(shù)輸入?yún)⒁?jiàn)使用說(shuō)明書(shū)。

3．3．1．2 序列（Sequence）的存儲(chǔ)利用菜單欄中的【File】→【Sequence】→【Save（SaveAs）】或單擊常用工具欄中的【保存】按鈕可對(duì) 當(dāng)前的序列（Sequence）進(jìn)行存儲(chǔ)。建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP\ Sequence中或其他個(gè)人文件夾中。

3．3．1．3 序列（Sequence）的調(diào)用單擊菜單欄中的【File→Sequence→Open】，選擇所需要的Sequence，單擊“打開(kāi)”。

3．3．2 序列（多次）進(jìn)樣采集分析首先要建立或調(diào)用一個(gè)Sequence并單擊菜單欄中的【File】→【Sequence】→【Open】，將所需要的Sequence打開(kāi)后，單擊【Sequence Run】按鈕，在【Run Range】中選擇“全部”或“部分”的序列范圍，單擊【Start】，儀器將開(kāi)始序列（多次）進(jìn)樣采集分析。

4 分析數(shù)據(jù)的處理和分析報(bào)告的打印

4．1 分析數(shù)據(jù)的處理和查看

4．1．1 分析數(shù)據(jù)的處理主要看是積分參數(shù)的設(shè)定。在不設(shè)定任何積分參數(shù)的情況下，儀器將按照缺省參數(shù)值進(jìn)行積分處理（儀器的缺省積分參數(shù)值 為：Width=0.2；Threshold=50）；如果對(duì)按照儀器的缺省積分參數(shù)值進(jìn)行的數(shù)據(jù)處理結(jié)果不滿意，可單擊菜單欄中的【Method→Integration Events】，進(jìn)行豐富多彩的積分事件的設(shè)置和規(guī)定，設(shè)置后單擊常用工具欄中的【Analyze】按鈕，儀器將按照要求對(duì)數(shù)據(jù)文件進(jìn)行再積分（再處理）。

4．1．2 分析數(shù)據(jù)的查看單擊常用工具欄中的【Report→View→Area?t(A)】按鈕，可隨時(shí)查看數(shù)據(jù)文件的百分面積報(bào)告結(jié)果。

4．2 分析報(bào)告的打印

4．2．1 數(shù)據(jù)文件的打開(kāi)單擊菜單欄中【File→Data→Open】，選擇所需要的數(shù)據(jù)文件，單擊【打開(kāi)】。

4．2．2 分析報(bào)告的打印單擊常用工具欄中的【Report→Print→Area?t(A)】按鈕，可隨時(shí)打印數(shù)據(jù)文件的百分面積報(bào)告結(jié)果。還可以利用菜單欄中的

【Method→Custom→Report】來(lái)編輯和打印內(nèi)容更為豐富的用戶報(bào)告。

4．3 分析數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)（另存）

儀器所采集的數(shù)據(jù)文件是自動(dòng)存儲(chǔ)的，包括對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行的再積分或再處理。但如果希望原有的數(shù)據(jù)文件不至于被處理后的文件所覆蓋，單擊菜單欄中【File→Data→Save As】或單擊常用工具欄中的【保存】按鈕即可完成相應(yīng)的工作。

5 色譜柱的沖洗

5．1 分析工作結(jié)束后，必須對(duì)色譜柱進(jìn)行充分的沖洗。

對(duì)于常用的反相色譜柱，一般分別以純水和純甲醇（或乙腈）代替原流動(dòng)相中的水相（如緩沖溶液）和有機(jī)相，按原流動(dòng)相比例，在1ml/min的流速下，沖洗60min；再以甲醇為流動(dòng)相沖洗30min。

5．2 在對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗的過(guò)和程中，為延長(zhǎng)D2燈的使用壽命，可將其關(guān)閉。

方法為：?jiǎn)螕舨藛螜谥械摹?/span>File→Method→InstrumentSetup→Detector→Lamp→Off】。

5．3 利用Sequence Run的運(yùn)行，可實(shí)現(xiàn)色譜柱的自動(dòng)沖洗。

方法是在Sequence中的最后一行加入一個(gè)事先編好的沖柱方法文件，或利用“Shut Down”的方法將一個(gè)事先編好的沖柱方法作為Shut Down文件。

6 關(guān)機(jī)

6．1 手動(dòng)關(guān)機(jī)

分析工作結(jié)束，并且色譜柱已充分沖洗完畢后，依次單擊工具欄中的【Turn Pumps On/Off】、【Instrument On/Off】按鈕，依次關(guān)閉畫(huà)面中的各個(gè)Windows界面并退出Class-VP工作站軟件；依次關(guān)閉儀器、計(jì)算機(jī)的電源開(kāi)關(guān)。

6．2 自動(dòng)關(guān)機(jī)

本 機(jī)可以實(shí)現(xiàn)無(wú)人自動(dòng)關(guān)機(jī)。點(diǎn)擊【Shut Down】按鈕后出現(xiàn)Shut Down條件對(duì)話框，在其中選擇Shut Down文件（應(yīng)選擇色譜柱沖洗文件作為Shut Down文件），在【Cool Down Time】中規(guī)定一個(gè)時(shí)間，該時(shí)間應(yīng)與沖柱文件的時(shí)間相一致，然后分別規(guī)定所要關(guān)閉的組件名稱(chēng)，單擊【Run】按鈕即可。

7 注意事項(xiàng)

7．1 2010 A和2010 C兩種型號(hào)的惟一區(qū)別在于2010 C的自動(dòng)進(jìn)樣器樣品架帶有制冷功能，冷卻溫度的設(shè)定在【File→Autosampler→Configuration】中，最低溫度為4℃。

7．2 可利用【File→Method→Print】打印出已打開(kāi)的方法文件，但其中并不包括2010 C自動(dòng)進(jìn)樣器的溫度，可以在【Method→Properties】中進(jìn)行標(biāo)明。

7．3 本機(jī)及其使用的工作站軟件具有豐富的功能，例如：右鍵菜單、鼠標(biāo)的單雙擊等不同操作方式會(huì)產(chǎn)生不同的功能和效應(yīng)，具體可參閱有關(guān)使用說(shuō)明書(shū)。